Храм находился на территории бывшего Белого города, наиболее древнейшей, после Кремля, части города Астрахани. Белый город располагался к востоку от кремля и заключал в себя сравнительно небольшое пространство: ограниченное с севера улицей Эспланадной (ныне ул. Трусова), с юга – Белгородской (ныне ул. Ленина) и с востока – Малой Демидовской (ныне ул. Михаила Аладьина). С 1630 года Белый город был обнесён каменною стеною, а до этого был ограждён деревянным тыном из заострённых на конце и врытых в землю брёвен и назывался острогом. Этот острог был устроен в 1559 году присланным для строительства астраханского кремля дьяком Иваном Выродковым. Им же была построена и первая церковь в остроге – в честь Рождества Пресвятой Богородицы. Предположительное время её построения – 1560 год. Была она первоначально деревянною и однопрестольною.

Само построение этой церкви имело особые для того причины. Правивший в это время в Русском государстве царь Иоанн Васильевич Грозный, как и многие образованные люди на Руси, в первую очередь святой митрополит Московский Макарий, был убеждён, что Астрахань – это древняя Тмутаракань, один из уделов русских князей. Посылая русских ратников на покорение Астраханского ханства в 1556 году, царь Иоанн Грозный вспоминал, как древний и славный его предок святой князь Владимир Киевский, просветивший русскую землю святым крещёнием, раздавая области детям своим, эту Астрахань, именовавшуюся тогда Тмутаракань, дал сыну своему Мстиславу, который воздвиг здесь храм в честь Пречистой Богородицы. Помня об этом и давая наказ о строительстве города Астрахани дьяку Выродкову, царь повелел ему выстроить и церковь в честь Рождества Пресвятой Богородицы, подобно той, что стояла в Тмутаракани. Этим закреплялась духовная преемственность прежней Тмутаракани – древнего удела русских князей и новоустроенной Астрахани.

Построенный храм первое время играл роль главного, соборного в городе, вплоть до 1568 года, когда прибывший в Астрахань игумен Кирилл строит в кремле новый соборный храм в честь Сретения Владимирской иконы Божией Матери. Рождество-Богородицкая церковь превращается в обычный приходской храм, прихожанами которого становятся в основном стрельцы. В 30-х годах XVII века в Белом городе были размещёны конные стрельцы, и это место стало называться Стрелецким городком, или Стрелецкой слободой, или просто Слободой. К концу XVII века церковь сильно обветшала, и в 1684 году была полностью перестроена по указанию самого Патриарха Иоакима: «Церковь Рождества Пресвятой Богородицы разобрать и прирубить к ней алтарь круглый тройной и верх на церкви сделать не шатровый, по чину прочих деревянных церквей». В 1707 году было начато строительство новой каменной церкви на месте прежней. Строилась она двухэтажной, о двух колокольнях.

Инициатором строительства явился митрополит Сампсон, а деньги жертвовало астраханское купечество. В изданном в Москве в 1925 году «Памятнике веры» указывалось, что церковь эта была построена на средства консула Кучукова. Но вряд ли это свидетельство достоверно, так как подьячий («консул») Василий Кучуков был убит мятежниками в 1705 году, во время стрелецкого «свадебного» бунта. Возможно, он что-то и жертвовал на строительство нового Рождество-Богородицкого храма, если речь о его построении велась до 1705 года. Достоверно же известно, что новый храм начал строиться в 1707 году, когда по указу Преосвящённого Сампсона появляется здесь церковный староста Михаил Иванович Сербин, который «по выбору вкладчиков и приходских людей церковный денежный и всякий приход собирает и в строении всякий церковный расход держит». Михаил Сербин был именитым астраханским купцом, и, видимо, в строительстве церкви его доля вложенных средств была немалой. Храм строился быстро и споро. Существует мнение, что в строительстве его принимал участие зодчий Дорофей Мякишев, под чьим руководством был построен Успенский собор. 7 сентября 1709 года был освящён нижний храм в честь Рождества Пресвятой Богородицы. На этом дело застопорилось. Средства вкладчиков из местного купечества истощились. Митрополиту Сампсону самому, на свои средства, пришлось достраивать церковь. Смерть его в 1714 году опять приостановила работы, и храм был полностью завершён только в 1722 году, ко времени приезда в Астрахань императора Петра I. Верхний храм в честь Вознесения Господня был освящён 4 мая 1722 года епископом Астраханским Иоакимом. В 1758 году в трапезе нижней церкви с левой стороны был устроен придел в честь Святителя Дмитрия Ростовского. После окончательного завершения Рождество-Богородицкая церковь стала одной из красивейших в городе, и только Успенский собор мог равняться с ней по величине и великолепию внешнего обрамления.

Вскоре Рождество-Богородицкая церковь снова обрела звание собора. Теперь это был соборный храм для общины православных грузин-эмигрантов. С 1724 года, когда грузинский правитель Картли царь Вахтанг VI бежал, изгнанный со своей родины турками в Россию, в Астрахань вместе с ним прибыла большая группа грузинской знати. Первоначально грузины имели своих священнослужителей при Благовещёнском женском монастыре, но позже им передали Рождество-Богородицкий храм. Здесь некоторое время хранилась главная святыня Грузинской Православной Церкви – крест равноапостольной Нины. Это был тот самый крест, свитый из виноградных лоз, который, по преданию, вручила Нине сама Пресвятая Богородица, отправляя её для просвещёния Грузинской земли светом Христовой веры. Имеретинский митрополит Тимофей вывез этот крест из Грузии после окончательного её захвата турками. Позже император Александр I после присоединения Грузии к России вернул крест на родину. Храм Рождества Пресвятой Богородицы стал также и усыпальницей для представителей знатных грузинских фамилий, скончавшихся в Астрахани. В нижнем храме было устроено несколько склепов с захоронениями.

В начале XIX века храм этот был приписан к Каспийскому флоту. Из всех изменений, произошедших за это время, нужно отметить устройство в 1866 году в трапезе нижней церкви, с правой стороны, придела в честь Пророка Илии. Но в 70-х го-дах XIX столетия морской порт был переведён из Астрахани в Баку и туда же переместилась морская флотилия. Большая часть церковной утвари была взята из Рождество-Богородицкой церкви флотом. После этих событий храм стал сильно нуждаться, прихожане его были по большей части люди бедные и, в конце концов, при такой скудности средств он дошёл до такого убогого состояния, что совершение богослужений в нём становилось почти невозможным. Было даже предложение закрыть самостоятельный Рождество-Богородицкий приход, а сам храм приписать к одной из ближайших церквей города Астрахани. Но впоследствии обстоятельства изменились к лучшему. Старостой храма стал радетельный и усердный хозяин мещанин Пётр Иванович Никитин. Он много потрудился для благоукрашения храма, за что был даже вознаграждён епархиальным начальством. Ставший его преемником на должности ктитора (старосты) купец Александр Андреевич Фадеев тоже немало потрудился на этом поприще. Благодаря его инициативе, на средства жертвователей в 1893 году был отлит и поднят на колокольню новый колокол в 160 пудов. В 1894 году на средства купеческой четы Трофима Антоновича и Пелагеи Васильевны Гуськовых были приобретены для храма зеркально-металлические кресты и 22 апреля были установлены на куполах храма и колокольни. В 1899 году на средства благотворителей был обновлён и заново освящён правый придел в честь Ильи Пророка.>

Внешний и внутренний вид храма
Храм был построен в форме корабля, по своему декоративному оформлению очень напоминал Успенский собор. Но в отличие от собора, являющим из себя монолитный кубический объём, без всякого присутствия трапезы и притвора. Рождество-Богородицкая церковь традиционно делилась на три части: храм, трапеза и притвор. Собственно храм почти в два раза превышал трапезу, имея меньший ряд окон на обоих этажах, но более высоких и светлых. С востока к нему примыкали три мощных полукруглых алтарных апсиды, очень схожих с подобными же формами в Успенском соборе. Также в отличие от собора храм имел всего одну купольную главу. Трапеза храма имела более удлинённую форму, к ней с запада примыкали две небольшие изящные башни колокольни. Главы на башнях, как и на храме, были позолочены. Двухэтажная пристройка, притвор как предполагают, была более позднего происхождения. Из притвора шли на верхний этаж две внутренние лестницы из белого камня, первоначально внешние и открытые.

Внутри трапеза нижнего храма имела два круглых столпа, на которых покоились своды. Здесь за столпами помещались два придела. Главный алтарь однопрестольный, помещался в трёх апсидах и имел похожее размещёние помещёний с соборным алтарём.

В верхний храм шло два входа с западной стороны, симметрично расположенных под башнями. Трапеза здесь была накрыта прямым потолком, а главная часть храма перекрыта сомкнутым сводом, завершающимся световым барабаном, откуда лился свет из окон, расположенных кольцом в основании купола. Алтарь в верхнем храме был подобен тому, что в нижнем.

Оба храма, как нижний, так и верхний, были украшены яркой, многоцветных тонов фресковой живописью начала XVIII века. Трёхъярусные золочёные резные иконостасы сохраняли иконы древнего, первоначального письма.

Про иконостас нижнего храма известно, что иконы в нём были писаны в 1720 – 1721 годах крестьянином Суздальского уезда, вотчины княгини Мавры Дмитриевны Куракиной, села Холуйки слободы Афанасием Никитичем Новосёловым с тремя товарищами. В Рождество-Богородицком храме имелось много древних, большого размера икон. Эти иконы почитались астраханцами, часто бравшими их для крестных ходов по городу. Нельзя не сказать и о древнем колоколе, висевшем на правой колокольне с надписью на нижнем поясе: «Благовествуй земля Славу Божию. 1667 год».

О крестных ходах
Из уважения к древности и значению Рождество-Богородицкого храма каждый год 8 сентября в день празднования Рождества Пресвятой Богородицы из Успенского собора сюда совершался торжественный крестный ход.

После революционных событий 1917 года Рождество-Богородицкий храм два раза снова на краткое время становился соборным храмом города Астрахани. Первый раз с января по апрель 1918 года, когда после январских боёв вход в кремль и Успенский собор для верующих был закрыт. Второй раз после захвата собора обновленцами в 1923 году. Архиепископ Фаддей (Успенский), приехавший в Астрахань в декабре этого года, сделал Рождество-Богородицкий храм своей кафедрой.

Но в феврале 1924 года обновленцы захватили нижний храм Рождество-Богородицкой церкви. А в апреле в их руках оказался и верхний храм. В 1930-е годы местные власти отобрали храм у обновленцев, и ещё некоторое время решалась его судьба. Рождество-Богородицкий храм состоял на учёте в Главнауке как памятник архитектуры, но это не смутило специально созданную комиссию, вынесшую 21 марта 1932 года ему приговор: «С учета Главнауки снять, так как астраханским представителем Главнауки брались на охрану все вообще старые церкви и монастыри города, не считаясь с отсутствием у некоторых художественно-исторической ценности». Храм решено было снести, так как в городе оставлялась одна барочной архитектуры церковь – Успенский собор и ему незачем иметь ещё одну барочную – Рождество-Богородицкую церковь». В заключении комиссии, решавшей судьбу церкви, было сказано: «что оставить её будет политическая ошибка». В том же году храм разобрали. Сейчас на этом месте, на перекрёстке современных улиц Советской и Коммунистической, находится сквер Пушкина.