Самым первым храмом обители была деревянная церковь, заложенная преподобными Сергием и Афанасием и князем Владимиром Андреевичем во имя Пресвятой Богоматери, честного Ее Зачатия праведной Анной. Церковь эта находилась на месте нынешнего Никольского храма. В 1380 году произошла Куликовская битва, которая положила начало освобождению Руси от татарского ига. Князя Димитрия Донского и его двоюродного брата князя Владимира Серпуховского благословил на эту великую битву их духовный наставник — Преподобный Сергий Радонежский. Во время самой битвы князь Владимир командовал засадным полком, который состоял из серпуховичей. На Куликовом поле русские войска наголову разгромили войско Мамая. Павшие воины Серпуховского ополчения были погребены в братской могиле в стенах Высоцкой обители.

Возвратившись в свою вотчину, князь Владимир Андреевич, прозванный за эту битву Храбрым и Донским, пожелал возблагодарить Бога за дарованную Им еще неслыханную на Руси столь славную победу над страшным и сильным неприятелем. В основанной им любимой Высоцкой обители над братской могилой убиенных воинов он строит величественный и дивный каменный храм во имя Зачатия Пресвятой Богородицы праведной Анной. Вот почему соборный храм Высоцкого монастыря представляет собой один из замечательных исторических памятников нашего отечества — памятник, воздвигнутый непосредственно самим доблестным победителем в память великой Куликовской битвы, чтобы через многие века сохранить память о том радостном великом событии, которое переживала тогда, ликуя и славя милость Божию, вся многострадальная Русская земля. Этот храм, претерпев некоторые переделки, сохранил в основных своих формах все данные, подтверждающие, что он — тот же подлинный храм, который некогда воздвиг герой Куликовской битвы. Собор имеет вид правильного квадрата. К его восточной стороне примыкает граненая алтарная апсида, свидетельствующая о несомненной древности, а вокруг идет крытая каменная галерея на массивных столбах. Собор в основных своих формах хранит характер зодчества XIV века. Правильность квадратов внешних частей этого храма, внутреннее устройство сводов, наличники его дверей и общий характер зодчества — все это дало возможность компетентному ученому-византологу академику Никодиму Павловичу Кондакову признать этот храм за памятник зодчества XIV века, то есть современный Димитрию Донскому. Однако в некоторых отдельных частях во внешнем его виде произошли значительные перемены — пять шлемовидных куполов заменены на луковичные главы, устроена железная кровля с прямыми скатами, расширены окна. По-видимому, собор со времени своего основания многократно возобновлялся и перестраивался, пока не принял современного вида.